S1 E10 : Discussion technique : Analyse d'effusion (Partie 1)

Bienvenue dans Tales from the Lab, où un vétérinaire toujours optimiste et un technicien un peu grincheux divertissent les auditeurs avec des histoires vraies et des récits fantaisistes autour des diagnostics en laboratoire.

Les noms ont été modifiés pour protéger l'anonymat des personnes concernées, mais les travaux de laboratoire sont réels.

Vous pouvez écouter cette émission pendant votre pause déjeuner, dans les transports ou lorsque vous vous cachez de vos enfants dans la salle de bain.

À chaque épisode, nous espérons vous rendre un peu plus intelligent, un peu plus brillant et vous donner plus d'assurance dans le laboratoire.

Bonjour. Bonjour. Je m'appelle Jessica et ce podcast s'intitule Tales from the Lab. Aujourd'hui, nous vous proposons un épisode spécial qui fait partie de notre série Tech Talks. Il s'agit de courts épisodes qui contiennent des informations vous permettant d'effectuer certains des tests diagnostiques que nous avons mentionnés dans notre podcast complet.

Le sujet de la discussion technique d'aujourd'hui est l'analyse des fluides.

Nous allons donc aborder la manière dont nous prélevons les échantillons,

dans quels tubes nous le plaçons, ce que nous pouvons faire avec ces tubes. Et puis, vous savez, quelques différences entre l'analyse interne et le laboratoire de référence.

Nos échantillons de liquide sont principalement prélevés par ponction abdominale et thoracique. Nous effectuons ces ponctions sous guidage échographique. Le clinicien chargé du cas identifie une poche de liquide, puis la prélève à l'aide d'une échographie.

C'est très pratique, car cela nous permet de visualiser de très petites poches de liquide, même une goutte pouvant fournir beaucoup d'informations.

Je voudrais souligner ici une petite astuce.

Nous l'avons appris lorsque le Dr Brown est venu à l'hôpital et que nous avons commencé à effectuer nos propres analyses de liquides en clinique. Elle a remarqué la présence d'une substance magenta sur nos plaquettes cytologiques et dans nos échantillons de liquides.

Nous avons alors compris que les médecins utilisaient du gel à ultrasons dans le cadre de leurs échographies. Or, ce gel provoque un artefact lorsqu'il est taché. Et peu importe le nombre de fois où vous essuyez le patient.

Tout type de gel à ultrasons utilisé va provoquer un artefact sur vos plaquettes, ce qui peut rendre difficile l'identification de bactéries ou de certains types de tumeurs.

Nous voulons donc éviter d'utiliser du gel à ultrasons lorsque nous savons que nous allons prélever un échantillon cytologique, qu'il s'agisse d'une cytologie à partir d'une masse ou d'un échantillon de liquide.

C'est juste une petite astuce, et nous allons publier une image à ce sujet sur notre compte Instagram. Des queues du labo. Tails s'écrit comme dogtail.

Une autre option dont nous disposons pour obtenir des échantillons de liquide, en particulier chez les patients qui ont subi une intervention chirurgicale, consiste à utiliser, si vous avez un drain Jackson Pratt en place, le liquide qui est collecté comme fluide pour votre analyse.

C'est très pratique pour suivre l'évolution. Nous avons beaucoup parlé de l'évolution dans bon nombre de nos cas, car il est important de pouvoir voir où les choses vont.

Nous utilisons cette méthode par exemple dans le cas d'une chirurgie pour retirer un corps étranger avec un drain Jackson Pratt en place. Nous observons l'évolution du liquide au cours de plusieurs jours et nous pouvons utiliser cela pour évaluer si nos antibiotiques sont efficaces

nous assurons qu'il n'est pas nécessaire de procéder à une nouvelle intervention chirurgicale

et permettre aux médecins de mieux déterminer quand retirer ce drain.

Nous avons donc identifié notre échantillon de liquide soit par échographie, soit si nous avons mis en place un drain Jackson Pratt. Maintenant, que faisons-nous avec cet échantillon et dans quels tubes le plaçons-nous ?

Il existe deux types de tubes dans lesquels nous recueillons le liquide. Le premier, et probablement le plus important, est un tube EDTA.

La seconde, que je considère comme un tube supplémentaire, sera un tube sans additif. Il aura donc un bouchon rouge ou blanc, selon le fabricant de vos tubes.

Nous allons d'abord parler un peu du premier tube EDTA, puis nous reviendrons sur le tube sans additif. Votre tube EDTA va remplir deux fonctions.

Premièrement, si vous avez un liquide particulièrement hémorragique, il empêchera la coagulation de l'échantillon et contribuera également à préserver la morphologie cellulaire. L'EDTA qu'il contient aide donc ces cellules à rester en bon état et en bonne santé.

Ceci est particulièrement important si vous envoyez cet échantillon au laboratoire de référence, car il ne sera pas frais. Notre tube sans additif, à bouchon rouge ou blanc, sera utilisé pour des tests tels que les tests biochimiques de culture.

Comme je l'ai dit, il s'agit d'un tube supplémentaire. Si vous disposez d'un échantillon suffisant, vous pouvez en remplir un afin de l'avoir à disposition en cas de besoin.

En ce qui concerne le volume de l'échantillon, nous voulons atteindre le volume de remplissage. Ainsi, si vous avez un tube EDTA qui nécessite deux ml, vous devez simplement le remplir avec deux ml.

Nous ne voulons pas trop remplir nos tubes, tout comme nous ne voulons pas trop remplir ceux destinés aux échantillons sanguins.

L'analyse des fluides comprend donc plusieurs éléments. Elle consiste à examiner visuellement notre échantillon pour déterminer sa couleur et sa turbidité, sa concentration en protéines, le nombre de cellules nucléées, plus ou moins le nombre de globules rouges ou le volume des cellules PAC, puis à effectuer une analyse microscopique.

Nous allons nous concentrer sur les trois premiers éléments, puis nous approfondirons l'analyse microscopique à un autre moment. Comment mesurer les protéines dans les fluides ?

Nous pouvons le faire de plusieurs façons. Nous pouvons utiliser nos réfractomètres, que nous utilisons pour mesurer la densité de l'urine, ou nous pouvons utiliser notre analyseur de biochimie.

Pour la réfractométrie, nous allons simplement placer une petite goutte de liquide sur notre réfractomètre, comme nous les ferions pour la densité urinaire, puis nous allons jeter un œil à l'intérieur. Souvent, vous y trouverez les mesures de la densité urinaire, ainsi que les mesures des protéines sériques ou plasmatiques, et c'est ce que nous allons obtenir.

Nous allons donc examiner cette série de mesures, et non la densité urinaire. Si nous utilisons notre analyseur de biochimie, nous allons simplement prendre la plaquette de protéines totales fournie avec notre analyseur de biochimie interne et mesurer les protéines à partir de celle-ci.

Voici une petite astuce utile concernant les mesures de protéines. Souvent, nos échantillons de liquide ont une certaine couleur. Ils peuvent être ******, un peu de laiteux ou des roses.

Si vous prélevez votre échantillon et que vous le centrifugez dans une centrifugeuse, comme vous le feriez pour une lame de sédiment urinaire, vous pouvez prélever le surnageant qui se trouve au-dessus du culot qui s'est condensé au fond et utiliser ce surnageant, ce liquide qui se trouve au-dessus,

pour mesurer votre protéine. En éliminant cette couleur, vous pouvez souvent obtenir une ligne plus nette sur le réfractomètre pour mesurer la protéine contenue dans l'échantillon.

Cela peut également aider votre analyseur de biochimie, qui est souvent basé sur le changement de couleur,

à ne pas avoir beaucoup de couleur dans l'échantillon. C'est donc une petite astuce qui peut vous aider à mesurer les protéines. Bon, nous avons parlé de la concentration en protéines. La couleur et la turbidité sont importantes, je pense, surtout si vous envoyez une plaquette cytologique au laboratoire de référence pour inclusion.

Nous allons donc décrire la couleur de l'échantillon, puis nous allons également décrire s'il est clair, s'il est trouble, s'il contient de gros morceaux flottants.

Cela couvre donc la partie relative à la couleur et à la turbidité.

Le nombre de cellules nucléées. Comment faire ? Le plus simple est d'utiliser nos analyseurs hématologiques, de mesurer les fluides qu'ils contiennent et de prendre ce qui correspondrait à votre nombre de globules blancs, c'est-à-dire le nombre total de globules blancs, le nombre de cellules, et de l'utiliser comme nombre de cellules nucléées.

Le Dr Brown aime dire que les analyseurs hématologiques sont des compteurs de cellules. C'est leur fonction.

Ils sont donc très efficaces pour compter ces cellules. Nous allons donc simplement prendre ce nombre total de globules blancs et cela constituera notre nombre total de cellules nucléées. Pourquoi ces éléments sont-ils importants ?

Si nous pensons à nos études techniques ou vétérinaires,

nos professeurs nous ont probablement parlé de la classification des fluides.

Des choses comme le transsudat, le modifié, le transsudat et l'exsudat. Ce sont en quelque sorte les catégories dans lesquelles nous commençons à classer nos échantillons de fluides. Elles aident les médecins à établir leur diagnostic différentiel.

Les éléments dont ils ont besoin pour classer ces fluides dans différentes catégories sont la mesure des protéines totales et le nombre de cellules nucléées.

C'est pourquoi il est extrêmement important de disposer de ces mesures.

Que faire si votre supérieur ne veut pas que vous placiez vos fluides dans votre analyseur hématologique pour obtenir le nombre de globules blancs pour votre numération totale des cellules nucléées ?

Nous devons alors passer à la préparation des plaquettes.

Il existe donc deux types de plaquettes que nous aimons préparer exclusivement pour notre analyse interne des fluides. Il s'agit de la plaquette directe et de la plaquette à sédimentation.

Notre frottis direct est similaire à un frottis sanguin. Nous allons donc prélever une goutte de liquide à l'aide du bouchon violet. Nous allons la placer à l'arrière de la plaquette.

Puis, comme pour un frottis sanguin, nous allons prendre notre plaquette étaleuse, la tirer vers l'arrière dans cette goutte, en la fixant à un angle compris entre 35 et 45 degrés.

Nous allons ensuite pousser pour obtenir un bord bien lisse. Cette lame directe sera celle que vous pourrez utiliser pour un comptage manuel du nombre total de cellules nucléées.

La lame à sédimentation est une petite lame supplémentaire que nous aimons utiliser, en particulier lorsque le nombre de cellules est très faible.

L'un de ces transsudats modifiés ou même un transsudat d'épanchement que nous voulons. Nous le ferons. Nous pouvons passer beaucoup de temps à rechercher les cellules présentes sur le frottis direct.

La lame à sédimentation permet donc de concentrer ces cellules afin que nous puissions les voir plus facilement. Nous n’avons pas besoin de chercher autant. Encore une fois, vous allez utiliser cette centrifugeuse et votre petit tube Eppendorf.

Vous allez mettre une petite quantité de votre échantillon de liquide dans ce tube à centrifuger et vous allez le centrifuger. Nous le centrifugons généralement à notre réglage normal, puis nous versons le surnageant.

Si vous souhaitez l'utiliser pour mesurer les protéines, vous pouvez également le faire.

Ensuite, nous reconstituons le culot de cellules qui se trouve au fond du tube et prenons une pipette de transfert. Tout comme pour le frottis sanguin, nous prélevons une petite goutte et la déposons vers l'arrière de la plaquette.

Ensuite, nous allons reprendre notre lame étaleuse et la replacer sur l'échantillon que nous avons là. Nous allons la pousser vers l’extérieur. Nous allons la pousser aux trois quarts environ avec notre lame étaleuse, puis la relever tout droit.

Cela permet d'obtenir une préparation en ligne. C'est pourquoi on l'appelle une préparation en ligne. Encore une fois, vous trouverez une image de cela sur Instagram, qui montre la différence entre une lame directe et une lame à sédimentation.

Mais cette lame préparée en ligne présente une ligne de cellules concentrées en haut. Cela facilite grandement la recherche de ces cellules, que nous aurions peut-être dû chercher partout sur notre lame directe.

C'est donc un moyen rapide et pratique de concentrer ces cellules.

C'est vraiment la fin de notre analyse des fluides. Notre analyse interne des fluides. Nous avons parlé de la couleur et de la turbidité. Il s'agit donc de décrire le fluide, car le pathologiste clinique du laboratoire de référence ne pourra peut-être pas le voir.

Nous avons parlé de la mesure des protéines. Nous pouvons soit utiliser notre réfractomètre, soit utiliser notre analyseur de biochimie. Puis nous avons parlé du nombre de cellules nucléées. Le moyen le plus simple est donc de placer votre fluide dans votre analyseur hématologique.

Dans un autre épisode, un autre épisode TechTalk, nous parlerons de la manière d'examiner le nombre de cellules nucléées à l'aide de ce direct que nous avons réalisé.

Nous avons également parlé des deux types de plaquettes pour réaliser le frottis direct et le sédiment, et des différences entre les deux. J'espère que vous avez apprécié cette brève discussion technique et nous vous donnons rendez-vous très bientôt.

Passez une excellente journée.

Tails from the Lab est une production d'Antec Diagnostics. L'objectif de ce podcast est de fournir des informations et des conseils, étant entendu que toute décision relative aux tests diagnostiques et aux traitements relève en dernier ressort de la discrétion du vétérinaire traitant dans le cadre de la relation établie entre le vétérinaire, le patient et le client.